
肉毒杆菌神经毒素和炭疽致命毒素的区别
肉毒杆菌神经毒素和炭疽致命毒素两者的强毒性是由于与该毒素相关的锌依赖性蛋白水解活性。
该酶活性的测量提供了用于检测毒素的潜在敏感和直接手段,以及使用高通量筛选来鉴定潜在毒素抑制剂的方法。监测酶活性的高效方法是基于荧光共振能量转移(FRET)底物的使用。这些荧光肽的一端包含供体荧光基团,而另一端包含合适的生色受体基团。首先通过供体/受体对之间的分子内能量转移来猝灭荧光。
通过适当的酶切割FRET底物会释放出荧光团,并恢复了完整的荧光。荧光强度的增加与存在的酶量成正比。通过记录荧光强度随时间的增加,可以连续监测酶活性。可以将随着裂解发生的相对荧光单位(RFU)的变化从使用校准肽产生的标准曲线转化为裂解的底物的纳摩尔,该校准肽是仅包含N-末端连接的荧光团的裂解的底物。对于A型肉毒杆菌神经毒素,未被神经毒素切割但在序列中包含所有剩余非特异性位点的对照FRET肽底物可用于筛选在复杂基质中可能发生的底物背景裂解。有七种免疫学上不同的肉毒杆菌神经毒素,称为血清型AG。每种神经毒素都裂解两个关键的靶蛋白之一,这些蛋白对于突触小泡融合到质膜和释放神经递质而言是SNAP-25或Synaptobrevin。
后者也称为VAMP-2。A,C和E型特异性结合并选择性裂解SNAP-25,而B,D,F和G型裂解Synaptobrevin。C型也切割Syntaxin。FRET肽基于这些天然底物的序列。这些毒素的酶活性也可以使用适当的天然底物并在SDS-PAGE凝胶电泳上监测裂解产物的产生来测量。突触小泡糖蛋白2c(SV2c)已被证明是肉毒杆菌神经毒素的蛋白受体,类型A(BoNT / A)和腔结构域环是BoNT / A结合的特定位置。SV2c的124个氨基酸结构域可作为GST融合蛋白获得。下表列出了可从List Labs获得的与肉毒杆菌毒素一起使用的FRET肽和天然底物。还显示了BoNT / A的蛋白质受体。
与肉毒杆菌毒素和破伤风毒素一起使用的肽,天然底物和受体
List Labs为炭疽酶(致命因子(LF))提供了两种FRET肽底物。这些LF底物可用于筛选作为潜在治疗剂的LF抑制剂。而且,已经设计了荧光标记的LF底物,其对复杂基质(包括血清和血浆)中的LF具有高度特异性。炭疽感染早期,致死因子高水平存在。这种肽底物可用于确定感染的高度灵敏,快速和特异性的检测方法。快速诊断和开始治疗对于成功治疗该疾病至关重要。LF肽底物和相关产品如下表所示。