体内和小鼠模型中的炎性体测定

本文介绍了可诱导和测量小鼠巨噬细胞，人外周血单核细胞（PBMC）培养物，小鼠腹膜炎和内毒素休克模型中不同炎症小体活化的检测方法。

基本协议1描述了如何使用不同的Toll样受体激动剂和TNF-α引发小鼠巨噬细胞中的炎性体；如何通过相应的刺激诱导NLRP1，NLRP3，NLRC4和AIM2炎性体激活；以及如何测量炎症小体激活介导的白介素（IL）-1的成熟？IL-18和凋亡。由于在小鼠和人类之间对于NLRP1确立的激动剂并不一致，因此基本协议2描述了如何激活人PBMC中的NLRP1炎性体。基本协议3描述了如何净化，交叉链接，并检测含有CARD（ASC）焦小体的凋亡相关斑点样蛋白。ASC焦小体的形成是炎性体活化的标志。ASC焦磷酸体检测的局限性是需要相对较大的细胞数。提供了替代方案1，以使用抗ASC抗体对ASC焦小体染色，并通过荧光显微镜在单个细胞中测量ASC斑点。腹腔注射脂多糖（LPS）和炎性体激动剂会诱发腹膜炎

这被认为是IL-1？以及其他促炎细胞因子以及中性粒细胞和炎性单核细胞的浸润。基本协议4描述了如何通过用LPS引发小鼠并随后用尿酸钠（MSU）攻击它们来诱导NLRP3炎性体活化和腹膜炎。还描述了测量血清中和通过腹膜灌洗的细胞因子的方法。最后，替代方案2描述了如何在脓毒症模型中通过高剂量LPS激发来诱导非规范的NLRP3炎性体激活。